基于磁珠微阵列的多重血型检测技术

来源： 　作者：　 时间：2015-10-27

【作者】 张强； 陈艺心； 赵树铭；
【机构】 第三军医大学第一附属医院输血科； 第三军医大学大坪医院检验科；
【摘要】 目的 建立并评价基于磁珠微阵列技术的血型表型的鉴定方法。方法 用Tris-HCl(0.01 mol/L,p H 7.4)裂解浓缩红细胞作为待检样本,将探针抗体包被于经醛基修饰的三维基片上,将待测样本与抗体进行反应,最后用C1q包被的磁珠识别抗原抗体复合物,在磁针的磁力吸附下将未结合的磁珠清除。显微摄影每个微阵列检测点,通过Photoshop图像分析判断信号强度。结果 针对108个检测样本的5种抗原(A、B、D、M、N)进行分析,以含有40%甘油的PBS做为反应介质能有效避免咖啡环的形成,方法敏感性为86%~93%,特异性为98%~100%。通过C1q包被的磁珠识别抗原抗体复合物能在10~20 min完成检测,所需样本10μL。结论 本方法有较高的敏感性与特异性,同一个芯片上可同时检测5种血型抗原,节约样本,且不受样本损伤的影响,为血型鉴定提供了一种新的手段。
【关键词】 输血； 血型鉴定； 蛋白质芯片； 磁珠芯片；

目前人类已发现35个血型系统、包含1500多个等位基因［1］，其中很多编码的血型抗原具有重要的临床意义。自ABO血型系统发现以来，输血安全性得到极大的提高。然而，随着更多的血型抗原的发现，为了更大程度上保证输血的安全性，血型鉴定靶标将不仅限于A、B及ＲhD抗原。现有血型鉴定技术包含基因分型与表型分型两大类。基因分型如PCＲ、测序以及基因芯片等［2］，这些技术虽然灵敏度高，但设备及人员技能要求高，且耗时较长，不适合于急救或户外应用。
现有的表型分型技术虽然能有效降低设备、人员、时间成本，但灵敏度受到一定限制，且均只能针对单个抗原进行检测，不能满足未来多重血型检测的临床要求［3］。为此，本研究将微阵列技术与磁珠分离技术相接合，建立一种快速多重的血型鉴定技术。
1材料与方法
1．1样本收集与处理经献血员同意后留取血液样本，EDTA-K2抗凝后离心取100μL浓缩红细胞，用PBS(0．01mol/L，pH7．4)洗涤3次后用1mLTris-HCl(0．01mol/L，pH7．4)存放4℃裂解，最后以10μLPBS重悬待用
1．2微阵列芯片的制备选用醛基修饰的三维基片(CapitalBio，75．5mm×25．2mm×1．0mm)作为反应基片。每张基片分为6个反应区，每个反应区包含8个检测点(4×2阵列)，用于一种抗原的检测。人IgG及血型抗体探针(单克隆抗体A、B、D、M、N，Abacam公司)包被于各个检测区，每个点点样0．2μL(100μg/mL，Abcam公司)。37℃温育30min后用10g/L牛血清清蛋白(BSA)封闭(加拿大BBI公司)，随后置于4℃保存备用。
1．3C1q包被磁珠取100μL超顺磁珠(SM3-P100磁珠，上海奥润公司)用0．01mol/L吗啉乙烷磺酸吐温(MES，上海生工公司，0．05%吐温-20)清洗3次，加100μL5mg/mL偶联剂3-(二甲基氨基)丙基乙酯碳亚胺盐酸盐(EDC，加拿大BBI公司)与100μL5mg/mLN-羟基丁二酰亚胺(NHS，上海生工公司)混匀，37℃振荡偶联30min。磁分离去上清后加100μLC1q(100μg/mL，Abacam公司)，37℃振荡偶联30min。最后以10g/LBSA封闭，置于4℃保存备用。
1．4血型微阵列检测在包被有抗体探针的反应点上加待测样品0．2μL，随后加0．2μLC1q偶联的磁珠，室温反应10～20min后用磁针吸去未接合磁珠。
1．5传统血清学鉴定所有样本的A，B，D，M，N采用微柱凝胶法进行鉴定(抗A，B，上海血液公司，抗D，M，N，密里博公司)，结果均按厂商推荐方法判读。对弱阳性样本(1+)采用试管法或平板法复检判读结果。

文献下载地址http://ybyxzz.cn/html/7815044239.html   论文摘自《延边医学》
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