大蒜蔗糖_蔗糖1_果糖基转移酶_1_sst_的酶学特征_文明

来源： 　作者：　 时间：2015-09-10

【摘要】【目的】研究大蒜（AlliumsativumL.）中蔗糖﹕蔗糖1-果糖基转移酶（1-SST）的酶学特征，为大蒜保鲜、加工和品质改良提供依据。【方法】采用饱和度10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%和100%的硫酸铵分级沉淀1-SST，以确定其所在的硫酸铵部位。分别取1-SST活力最高的硫酸铵部分与底物蔗糖反应，研究其在不同的温度、pH、离子强度、底物质量浓度等条件下合成高果聚糖的能力，即采用高效液相色谱-蒸发光散射（HPLC-ELSD），测定1-SST反应前后的1-蔗果三糖的含量，进而计算出1-SST活力大小并总结出其在不同的温度、pH、离子强度、底物质量浓度等条件下合成高果聚糖反应的规律；采用的色谱柱为PrevailCarbohydrateES柱（250mm×4.6mm，5μm），色谱柱柱温箱温度为40℃，流动相最大限压20MP，流动相为乙腈和水，其流速为1.0mL·min-1 ，ELSD撞击器关闭状态，漂移管温度90℃，载气流量2.5L·min-1 （空气）。其梯度洗脱方式为：0min，75%乙腈﹕25%水；15min，65%乙腈﹕35%水；30min，50%乙腈﹕50%水；35min，75%乙腈﹕25%水；40min，75%乙腈﹕25%水。【结果】在上述测定条件下，果糖、葡萄糖、蔗糖、1-蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖6种糖完全分离，出峰时间仅为20min，测定方法可靠、灵敏度高，满足了测定1-SST活性的要求。以50%（w/w）蔗糖为底物时，仅产生1-蔗果三糖，无其它高果聚糖的产生，证实了在所试条件下，大蒜中1-SST反应具有专一性。大蒜1-SST主要存在于30%—40%硫酸铵饱和度部分，其中0—30%，40%—70%有轻微活力，未发现70%—100%硫酸铵组分有1-SST的活力。
【关键词】 果聚糖；蔗糖﹕蔗糖果糖基转移酶；酶学特征；大蒜；1-蔗果三糖
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